Адамның эмбрионалды бағаналы жасушалары

Сергей Львович Киселев, проф., б. б.н., меңгерушісі зерт. РҒА генінің биологиясы ин-та обырының молекулалық генетикасы. Мария Андреевна Лагарькова, к. б.н., жет. сол институтта дің жасушаларының биология топтары.

Қазіргі заманғы медицинаның ең жас бағыты жасушалар қандай да бір қажетті факторлардың көзі болып табылатын жасушалық технологиялар деп санауға болады, мысалы, вакцинотерапия кезінде ісік антигендері. Бірақ жасушаны кез келген субстанциялардың көзі ретінде ғана емес, Регенеративті медицина үшін де пайдалануға болады. Мұнда діңдік жасушаларға негізделген технологиялар ерекше қызығушылық тудырады. Шексіз бөлу және жасушалардың әртүрлі типтеріне түрлендіру қабілеті (плюрипотенттілік деп аталатын) оларды терапияның трансплантациялық әдістері үшін мінсіз материал етеді. Ересек ағзаның дің жасушалары ең қолжетімді болып саналады. Алайда, оларды саралаудың нақты әлеуеті әлі нашар зерттелген.

Бұл тұрғыда адамның эмбриональды дің жасушалары (СКҚ) өте тартымды: олардан ағза жасушаларының кез келген түрлерін алуға болады. Бірақ көптеген қасиеттер мен клеткалық механизмдер «оқпандық» деп аталады, оны трансформацияланған, рак клеткасына өте жақын қояды. Сондықтан бүгінгі күні эмбрионалды жасушалардың сипаттамаларын зерттеу маңызды. Адам СКҚ-ның бірінші желілерін алған сәттен бастап өткен сегіз жыл ішінде мәдениетте дифференциалды емес жасушалардың өзін-өзі ұстауын немесе оларды саралауды қамтамасыз ететін механизмдердің аз ғана бөлігін ғана анықтауға мүмкіндік алды.

Жақында ғана зерттеу үшін қол жетімді адамның ЭСК желілерінің саны аз болды. Қазіргі уақытта олар әлдеқайда көп болды, бірақ әдіснамалық қиындықтар мен олармен жұмыс істеу құнының жоғары болуы зерттеушілер шеңберін шектейді. Адамның эмбрионалды жасушалары саласындағы зерттеулерге шектеулер аз емес этикалық жағын салады. Адамның СКҚ-мен жұмыс істеу әдептілігі немесе әдептілігі туралы пікірталасқа қарамастан, мәселе адамның СКҚ саласында зерттеулер жүргізбейтіні, ал осы салада зерттеулер қалай жүргізілетіні анық. Соңғы екі жылда көптеген елдерде адамның эмбрионалды дің жасушаларын зерттеуге рұқсат беретін заңдар қабылданды.

Эмбрионалды дің жасушалары жатырдың қабырғасына қондырылмаған кезде эмбрион дамуының ең ерте сатыларында бластоцистаның ішкі жасушалық массасынан алынады. Бұл ішкі жасушалық массаның жасушаларынан кейін тұтас организм дамиды. Жиі, әсіресе орыс тіліндегі әдебиетте, эмбрионалды дің жасушалары Жүктілік дамуының әр түрлі мерзімдерінің постимплантациялық эмбрион жасушалары деп аталады. Біз тек бластоцистадан шыққан шынайы эмбрионалды дің жасушалары туралы айтатын боламыз, — эмбрион 150-200 трофоэктодерма жасушаларынан және ішкі жасушалық массадан шамамен тең қатынаста тұратын кезеңде.

Тұрақты желілер

Адам ЭСК тұрақты жасушалық желілерін алғаш рет американдық зерттеуші Дж алды.Томсон 1998 ж. [1]. Бұл жетістіктің алдында М. Эванс пен М. Кауфман жұмыс істеді. 1981 жылы олар алғаш рет плюрипотенттілік қасиетіне ие сүтқоректілер жасушаларының тұрақты дақылдарын алу мүмкіндігін көрсетті. Тінтуірдің СКҚ желілері in vitro мәдениетінде жүздеген екеу бойы дифференцияланған күйде қалды, содан кейін in vivo жануардың арнайы тіндерін қалыптастыруға қатыса алды. 1995 ж. Томсон әріптестерімен бірге, бұлшық ет жасушаларын бөлу технологиясын түрлендіріп, приматтар ЭСК сызығын алды, ал 1998 ж. — адам жасушаларының сызығын алды.

Адамның ЭКК тұрақты желілерін алу үшін жасанды ұрықтандырудан кейін талап етілмеген адам бластоцистерін алады. Әдетте мұндай процедурадан кейін бластоцист саны реципиентке қарағанда көп. Оларды мұздатуға, жоюға немесе донорлардың келісімімен ғылыми мақсаттар үшін пайдалануға болады. Ұрықтандырудан кейін 4-6-ші күні адамның эмбриональды жасушаларын бөліп алу жақсы. Алдымен проназа ферментінің көмегімен бластоцистаның мөлдір қабығын ерітеді, содан кейін комплемент-тәуелді лизис әдісімен трофобластар жойылады. Ішкі жасушалық массаны өсу факторларының көзі болып табылатын инактивирленген бұлшық ет эмбрионалды фибробластардан жасалған төсекке дақылдық ортаға салады. Жасушаларды ауыстырып, сіз іс жүзінде шексіз бөлуге қабілетті жасушалық желіні алуға болады. Бүгінде әлем зертханаларында СКҚ 150-ге жуық желісі бөлінген. Біздің елімізде эмбрионалды дің жасушалары 2003 жылы РҒА генінің биология институтында және РҒА цитология институтында алынған.

Сур. 1. Адам ЭСК үш колониясы.

Тінтуірдің ЭСК айырмашылығы, адам жасушалары өте нашар жеке жасушалар түрінде өседі,

ал колонияда ғана өмір сүреді. Мұражайында. 100. Бұл жерде және одан әрі авторлардың фотосуреттері тінтуірдің эмбрионалды фибробластарынан митотикалық инактивацияланған эмбрионалды фибробластардан жасалған төсекте жасушалардың тығыз колонияларымен өседі (сурет.1). Адамның ЭСК сызықтарын алудың табыстылығы морфологиялық қалыпты бластоцисттерді пайдалану кезінде өте жоғары, олардың жартысы кариотиптік қалыпты жасушалар бере алады. Бұл нәтижелер реципиенттерге ауыстырып салғаннан кейін эмбриондарды имплантациялау деңгейіне сәйкес келеді. Жасушалық массаны өсіру өте қиын. Бұлшық ет жасушалары ферментативті өңдеуден кейін жеке жасушаларға дейін жақсы өседі, бірақ жасушааралық байланыстан айырылған адам жасушалары әдетте өледі. Сондықтан оларды жеке фрагменттерге дейін 50-500 жасушадан бөледі (немесе ферментативті өңдеу немесе микроқұралдардың тілімдеріне кесу арқылы механикалық жолмен).

In vitro ооциттерімен манипуляциялар берілген генотипі бар және тиісінше, әлеуетті донормен иммунологиялық үйлесімді адамның ЭСК желісін алуға мүмкіндік береді. Бұл жерде бірнеше тәсіл болуы мүмкін: соматикалық жасушалар ядроларының тасымалдануы, партеногенез немесе жасушалардың бірігуі. Соматикалық жасушалар ядроларының тасымалдануы жиі клондау деп аталады. 2005 жылдың соңғы айларында В. Хвангтың жетекшілігімен Сеул ұлттық университетінің ғалымдары жұмыстарының айналасында детективтік тарих пайда болды. 2004-2005 жж. «Science» журналында олар соматикалық жасушаның ядросын ооцитқа ауыстырғаннан кейін алынған ішкі жасушалық массадан адамның СКҚ желісін алу әдістемесін сипаттаумен екі жұмыс жариялады. Өкінішке орай, жұмыстар орасан зор бұрмаланған, себебі әлі күнге дейін анықталмаған. Коммерциялық немесе саяси мақсаттарда үшінші тұлғалардың барлығын алдын ала ұйымдастыруы мүмкін екендігі жоққа шығарылған жоқ. Алайда бұл оқиғалар мәселеге деген қызығушылықты төмендетіп қана қоймай,осы бағыттағы жұмыстарды жандандырды.

Негізгі сипаттамалары

Барлық клеткалық дақылдар сияқты эмбрионалды дің жасушалары нақты сипаттауды қажет етеді. Ең қарапайым-бұл сыртқы сипаттама, бірақ ол жасушалардың қасиеттері туралы өте шектеулі ақпарат береді. Соңғы уақытта жасушаларды беттік антигендер бойынша ажырату қабылданған, олар қандай да бір түрін толық сипаттайды. Мысалы: SSEA-3, SSEA-4 — гликолипидтердің антиген детерминаттары (эпитоптар) және TRA-1-60, TRA-1-81 — жасушалық беттің бір протеогликанның әртүрлі эпитоптары.

Белгілі бір маркерлер жиынтығының болуы жасушалардың адамның СКҚ-ға жататындығы туралы айтады, бірақ олардың ұзақ пролиферацияға қабілеттілігі туралы емес. Ол дене ферментінің белсенділігімен және дене өлшегіш қайталаулардың ұзындығымен анықталады. Соматикалық жасушалардың шектеулі саны бар ұзындығы дене малы, ал дене белсенділігі әдетте өте жоғары емес. Керісінше, ісік жасушаларында ферменттің белсенділігі өте жоғары болып қалады,ал денелік қайталаулардың ұзындығы сақталады. Осы қасиетке эмбрионалды дің жасушалары да ие.

ЭСК иммунологиялық маркерлері және жоғары денелік белсенділік трансформацияланған жасушаларға, яғни генетикалық өзгерістер болған жасушаларға тән. Демек, адамның ЭСК желілерінің дәл сипаттамасы үшін кариотип талдауы міндетті. Хромосомалардың қалыпты жиынтығы және хромосомдық аномалиялардың болмауы-бұл қалыпты кариотиптің белгілері, алайда, жасушаларды өсіру процесінде бұзылуы мүмкін. Сонымен, ұзақ өсіру кезінде (шамамен екі жылдан кейін) біз жасушалардың өсу жылдамдығында, сондай-ақ олардың саралауға қабілеттілігінде айтарлықтай өзгерісті атап өттік. Кариотиптік талдау 18 хромосомадағы бұзылыстарды және кариотиптің тұрақсыздығы үрдісін көрсетті. Бұл мәдениеттегі жасушалардың аномальді мінез-құлқына себеп болды. Кейіннен біз әртүрлі хромосомалық аберрациялармен СКҚ-ның басқа желілерінің субклондарын бірнеше рет анықтадық. Жақында біздің бақылауымызды растайтын жарияланым пайда болды. Демек, адам ЭКК ұзақ өсіруде олардың кариотипін қатаң бақылау қажет.

Молекулалық-генетикалық механизмдері самоподдержания

Эмбрионалды дің жасушаларының тамаша қасиеттерінің бірі — олардың мәдениетте плюрипотенттілігін сақтау қабілеті. Бұлшық ет жасушаларында эксперименталды тексеру оңай: in vitro өсірілетін бір жасушадан тұтас денені қайта құруға болады. Генетикалық «нокаутпен»жануарларды дәл осылай алады. Технологияның мәні генетикалық модификацияланған in vitro тінтуірдің эмбриональды жасушаларын бластоцистаға енгізеді, ол жалған жүкті тінтуірді имплантациялайды. Нәтижесінде жасушалардың бір бөлігі — реципиенттің бластоцистасынан, ал бір бөлігі генетикалық түрлендірілген химиялық тышқандар туады. Егер мұндай жасушалар ұрық жолына түссе, екінші буында барлық жасушалары бір генетикалық түрлендірілген эмбрионалды жасушаның ұрпақтары болатын жануарды алуға болады.

Бұл технология қатаң детерминирленген тіндердегі белгілі бір гендерді «өшіруге» ғана емес, сонымен қатар аурулардың модельдік жүйесін жасай отырып, ақаулы «қосуға» мүмкіндік береді. Түсінікті себептер бойынша адам жасушаларымен мұндай рәсім мүмкін емес. Бұл жерде плюрипотенттілікті тексеру үшін адамның эмбриональды жасушалары иммун тапшылығы тіндерін енгізеді. Нәтижесінде жануарларда қатерсіз ісік — тератомалар қалыптасады, онда қалыптасқан тіндердің бірнеше түрін анықтауға болады [3]. Алайда СКК жай-күйінің тұрақты мониторингі үшін және өсірудің оңтайлы жағдайларын қамтамасыз ету үшін мұндай әдіс тиімсіз болып табылады. Мұнда эмбрионалды дің жасушаларының ерекшеліктерін анықтайтын молекулалық механизмдерді анықтау өте маңызды, атап айтқанда олардың мәдениетте дифференциалды емес күйде қалу қабілетін анықтау. Кейбір механизмдер — тінтуір мен адамның ЭСК үшін ортақ, ал кейбіреулері әртүрлі.

ЭСК өзін-өзі ұстауда OCT4 транскрипциялық факторы қатысады, ол тінтуір эмбрионының сегіз жасушалық кезеңінен көрінеді. Ол бластоцист ішкі жасушалық массаны қалыптастыру үшін қажет (трофоэктодерма жасушаларында ол жоқ). Oct4 генінің тиісті белсенділігі эмбрионалды жасушалардың дифференциалды емес жағдайын қолдайды, ал оның жоғарылауы немесе болмауы олардың энтодерма және мезодерма немесе трофобласт клеткаларына тиісінше түрленуін тудырады [4]. Соматикалық тіндердің жасушаларында oct4 генінің экспрессиясы табылған жоқ, соңғы уақытта ересек ағзаның дің жасушаларында оның төмен белсенділігі туралы хабарламалар пайда болды. ЭСК дифференциялаудың басында да эмбриоидты тельцаға оct4 генінің белсенділігі төмендейді.

Тінтуір мен адамның ЭСҚ плюрипотенттілігін ұстап тұруда, сондай-ақ nanog гомеобоксикалық транскрипция факторы қатысады. Егер ген nanog бұғатталса, эмбриондық жасушалар примитивті энтодермге айналады. LIF өсу факторы болмаған кезде nanog генінің жоғары белсенділігі тінтуірдің СКҚ плюрипотентті күйін қамтамасыз етеді. Oct4 геніне ұқсас, соматикалық тіндердің жасушаларында nanog гендері, фетальді ми, репродуктивті мүшелерден (ұрықтар мен аналық бездер) және эмбриональды карциноманың жасушаларынан басқа көрінбейді. Эмбриоидты тельцаға адам СКҚ-ның өздігінен дифференцировкасына қарай nanog генінің белсенділігі төмендейді.

Генетикалық механизмдерден басқа, клетканың тағдырын эпигенетикалық механизмдер деп атайды (яғни ДНҚ реттілігінің өзгеруіне байланысты емес гендердің жұмыс істеуіндегі жасушамен зерттелетін өзгерістер). Олардың іс-әрекетінің жарқын мысалы әйелдер ХХ-клеткаларындағы Х-хромосомалардың бірінің инактивациясы бола алады. Эпигенетикалық механизмдер гендердің жұмысын бақылай отырып, ерте эмбрионалды даму процестерінде маңызды рөл атқарады. Гендердің реттеуші аудандарын эпигенетикалық модификациялау дамудың кейінгі кезеңдерінде олардың функцияларын ажыратуды қамтамасыз етеді. Бұл өте маңызды, өйткені дер кезінде емес немесе Үйлестірілген гендердің жұмысы жасушалардың өлуіне немесе олардың өзгеруіне әкелуі мүмкін. Мысалы, oct4 генінің реттеуші ауданы ересек ағзаның барлық жасушаларында эпигенетикалық модификацияланған. Мұндай өзгеріс ересек ағзаның соматикалық жасушаларының ядроларын ооцитке ауыстырудың негізгі мәселелерінің бірін құрайды. Біздің зертханада ересек ағзаның жасушаларында nanog генінің реттеуші ауданы эпигенетикалық түрлендірілген, бұл ядролардың тасымалдануын одан әрі қиындатады.

Микрочиптер сияқты қазіргі заманғы талдау әдістері бірнеше мың Гендердің белсенділігін тез анықтауға мүмкіндік береді, бұл жасушаның молекулалық-генетикалық жағдайының дәл көрінісін жасайды. Бұл әсіресе терапияға арналған ұзақ өсірілетін жасушалар үшін маңызды.

Сүтқоректілердің эмбрионалды дің жасушаларының плюрипотенттілігін ұстап тұру туралы айта отырып, сыртқы өсу факторларының, оның ішінде фибробластардың төсем-фидер ретінде (ағылш. feed-тамақтандыру, тамақтану). Тышқанның және адамның СКҚ алғашқы жасушалық сызықтары жасушалардың ең жақсы өсуін ғана емес, олардың дифференцияланған күйін қамтамасыз ететін бастапқы мышиналық эмбрионалды фибробласттарды пайдалана отырып алынған. Кейінірек оларды өлмес жасушалық сызықпен алмастырды. Алайда, бұл жасушалық желілерді регенеративті медицинада немесе гендік терапияда қолдануға болмайды деп саналады, себебі бұлшықет жасушаларынан патогенді микроорганизмдер мен вирустардың тасымалдануы мүмкін. Сонымен қатар, адам жасушалары тінтуір антигендерін ұсына бастайды, бұл трансплантаттың бас тартуын тудыруы мүмкін. Бүгінгі күні Адам ЭКК желісін өсіру үшін кейде адамның шеткі Салының фибробластары қолданылады. Әдебиетте мұндай желілер мен фидерсіз жағдайларда алынғаны туралы жеке басылымдар пайда болды.

In vitro саралау

In vitro СКК спонтанды дифференциалдау бекітілген колонияларды ұзақ өсіру кезінде және эмбриоидты телесцалардың өсуіне қарай суспензияда жүреді, олар кейбір дәрежеде эмбриогенездің ерте оқиғаларының үлгісі болып табылады. Бұлшықет ЭСК жағдайында эмбриоидты тельца жекелеген жасушаларды немесе жасушалар топтарын сфералық құрылымдарға аггреттеу арқылы алынады. Бұлшықет жасушаларына қарағанда, адамның барлық желілері оңай эмбриоидты торларды құрайды, және жалғыз жасушалардан ешқашан. Қысқа өсірілетін эмбриоидты торларда барлық үш ұрықтық жапырақтар үшін ерекше маркерлер тұратын жасушалар топтары байқалады (сурет.2), бірақ одан әрі даму тоқтатылады. Бүгінгі күні органогенездің тежеу себептері туралы нақты жауап жоқ; мүмкін, бұл үшін сырттан қолданылатын эмбрион поляризациясы қажет.

Тығыз жасушалық шариктердің жетілуіне қарай қуыстар пайда болады, және біраз уақыттан кейін эмбриоидты тельце аясына айналады. Оң жақта эпителий жасушаларына (қызыл), мезодермаль жасушаларына (жасыл) антиденелер арқылы эмбриоидты телесалардың кесінділерін иммуногистохимиялық бояу, жасуша ядросы көк түсті. Мұражайында. 50.

In vitro эмбриональды дің жасушалары нейрондар мен глии, эндотелий, кератиноциттер, трофобластар, кардиомиоциттер, остеобласт, қан жасушалары, гепатоциттер, инсулин-продуцциялаушы жасушалар және т. б. арнайы маркерлері бар әртүрлі жасушаларға айналады. Алайда көптеген маркерлер тасығыштарының функционалдығы әлі де аз дәлелденген.

2001 жылы алғаш рет сипатталған дифференцировку ЭСК адам нейрондық және астроциты [5]. Эмбриоидты торларда қалыптасатын нейроэктодерманың жасушалары механикалық түрде шығарылып, тиісті егу жағдайларына (жасушалардың пролиферациясын қамтамасыз ететін факторлар) салды, онда нейросфералар қалыптасты. Нейральды ізашарлар жаңа туған тышқандарды миға ауыстырғаннан кейін нейральды жасушалардың үш түрін құруы мүмкін және терат берген жоқ.

Содан бері көптеген жұмыстар атқарылды. Нейральді ізашарлар санын арттыратын факторлар (ретиной қышқылы, BMP сигналдық жолының блокаторы және т.б.) табылды; белгілі бір мамандықтағы функционалдық нейрондық жасушалардың (мысалы, дофаминергиялық нейрондардың) дифференциялануы көрсетілді. Жақында бойлық факторлардың көзсіз ортада нейроэктодермальды ізашарларды ұзақ (100-ден астам жолаушы) өсіру мүмкіндігі туралы деректер алынды.

Нейронды ізашарлар эмбриоидты телескоптар сатысы арқылы немесе тікелей адамның ЭСК сызықтарының дифференцияланбаған колонияларынан алынады. Нейроналды ізашарларды эпидермалдық өсу факторы мен фибробласттардың өсу факторының қатысуымен нейросфер түрінде 25 жолаушыға дейін суспензияда өсіруге болады. Ауыстыру кезінде нейросфер арналған культуральный пластик жабылған, компоненттері внеклеточного матрикса, олар тіркеледі және преобразуются в нейрондық және астроциты. Ортаға триодтиронин мен белгілі бір өсу факторларын қосқан кезде нейросферлерде олигодендроциттердің ізашарлары пайда болады. Мүмкін, олигодендроциталар және жұлынның жарақатын емдеудің клиникалық сынақтары кезінде апробациядан өтетін адамның ЭҚК-нен алынған алғашқы жасушалар болады. Миелиннің негізгі ақуызына құпия бұл жасушалар жұлынның жүйке тінінің зақымдалған бөлігін қалпына келтіру үшін қажет. АҚШ-та бұл сынақтарды 2006 жылы бастау жоспарланып отыр.

ЭСК-ның эмбриоидты телескоптардан кератиноциттерге жинақталған дифференциациясы 2003 жылы сипатталған.

Тінтуірдің эмбриональды жасушалары кардиомиоциттерге оңай бөлінеді. Жасушалардың дифференциалды емес жағдайын қолдайтын қоректік қабат пен LIF факторы жойылғаннан кейін бірнеше күннен кейін, культуральды тостағандарда жасушалардың қысқаратын колониялары пайда болады. Белгілі бір жағдайларда олар қалыпты ересек кардиомиоциттердің электрофизиологиясына ие, сонымен қатар миокард бұлшық етіне функционалды интеграциялануы мүмкін. Бұлшық ет жасушаларына қарағанда, адам жасушаларының спонтанды дифференциялануы СКҚ — ның әр түрлі сызықтарында-эмбриоидты денелердің 70% қысқаратын учаскелерінен дифференциалаудың толық болмауына дейін байқалады. Адам ЭСК-дан алынған кардиомиоциттердің ізашары nkx 2.5, GATA4 транскрипциялық факторларын, содан кейін кардиомиоциттердің арнайы маркерлерін (тропонин 1 және миозиннің ауыр тізбегі) синтездейді. Біз кардиомиоциттердегі ЭСК-ның үш сызықтың екі сызығын байқадық, және де қысқаратын учаскелер эмбриоидты телескалардың өте аз пайызында байқалды.

Гемопоэздік қатардың жасушалары алғаш рет адамның СКҚ стромальды фибробласттар сызығымен бірге өсіру кезінде, сондай-ақ гематопоэздік жасушалардың өсу факторларын пайдалана отырып алған. Эмбриоидты тельцаларда гематопоэтикалық жасушалар мен эндотелиалды (гемангиобласт) ізашарлар қасиеттеріне ие жасушалардың популяциясы анықталды.

Біздің зертханада эндотелий жасушаларына адамның ЭСК-ін тікелей (яғни эмбриоидты телескоптың сатысын соқпай) саралау бойынша жұмыстар жүргізілуде және оларды селекциялау әдістері әзірленуде. Коллагендерді матрикс, арнайы орта және өсу факторлары ретінде пайдалана отырып, біз эндотелиалды жасушалар шамамен 50% құрайтын жасушалық популяцияларды алдық. Коллагендік матриксте олар тамырлы эндотелийдің ерекше маркерлерін көтеретін капиллярлы тәрізді құрылымдарды құрайды (сурет.3). Біз сd31-оң эндотелиалды предшественников иммуномагнитті селекция әдісін дифференциялаудың ерте (4-5-ші күн) кезеңдерінде сәтті қолдандық, өйткені кеш кезеңдерде капиллярлы құрылымдардағы жасушааралық байланыстар энзиматикалық ыдырауға қиындықпен беріліп, жасушалар өміршеңдігін жоғалтады. Селекция нәтижесінде біз эндотелиалды жасушалардың гомогенді популяциясын, in vitro капиллярлы құрылымдарды бөліп алуға қол жеткіздік.

Сур. 3. Эндотелия жасушаларының таралуымен таза бөлінген in vitro түзілген эндоваскулярлық желі,

(CD31 маркеріне боялған). Мұражайында. 200.

Энтодерманың туындыларымен қиын болды. Инсулин-секретирлеуші клеткалар мен гепатоциттерге адам ЭКК-ның саралануы туралы жарияланған хабарламаларға қарамастан, олардың функционалдығы көрсетілмеген. Сонымен қатар, белокты және генетикалық маркерлер бойынша олар жетілген инсулин-секретирлеуші жасушалармен немесе гепатоциттермен толық сәйкес келмейді. Энтодермге түрлендіруді анықтайтын факторлар және ерте энтодермальды дифференциалдау маркерлері әлі белгісіз.

Сонымен, бүгін түрлі түрдегі жасушалардың массасын өңдеу үшін белгілі бір талаптарға сәйкес болуы тиіс саралаудың әзірленген моделі бар екені анық:

— эмбрионалды дің жасушаларын стандартталған жағдайларда генетикалық манипуляцияларды өңдеу және клоналды өсу технологиясын сақтау арқылы өсіру қажет;

— индуцирленген саралауды көбінесе қалаған жасушалық фенотипке жүргізу және жасушалардың қажетті популяцияларын сұрыптау мүмкіндігі болу қажет;

— саралаудың барлық кезеңдері ұдайы жаңғыртылып, бақыланатын болуы тиіс, ал оны индуцирлейтін факторлардың әрекеті жақсы белгілі;

— Сарысу, салқындатылған орта, жасушалық экстракттар және т. б. сияқты көп компонентті стандартталмаған факторлардан аулақ болу керек.

Адам ЭКК негізінде жасушалық технологияларды әзірлеудің ғылыми-технологиялық аспектілері осындай. Сонымен бірге адам ЭКК-ны зерттеу мен қолдануға байланысты бірқатар этикалық мәселелер бар.

Адам ЭСК сызықтарының айналасында проблеманың моральдық жағына, атап айтқанда ЭСК бөлу үшін талап етілмеген бластоцистерді пайдалану мүмкіндігіне қатысты шексіз пікірталастар жалғасуда. Бұл сұраққа әлі жауап жоқ. Бұл жерде профессор В. Рейктің ерте эмбрионалды даму саласындағы белгілі ғалымының айтқан сөздерін келтіргім келеді:»әзірге осы технологияның көмегімен біреуді құтқармайды, әдептілік туралы әңгімелері мен зерттеулерге тыйым салу тоқтатылмайды».

Адамның дің жасушалары саласындағы зерттеулердің қарқынды дамуы Калифорния штаты 3 млрд АҚШ долларын бөлу туралы 71 ұсынысты қабылдауға ынталандырды. ЭСК жаңа жасушалық желілерін алу үшін 10 жылға. 2005 ж.мамырда АҚШ-тың Ұлттық Ғылым академиясы адам ЭКК зерттеу саласындағы этикалық ережелерді ерікті түрде қабылдауға шақырды. Бұл ережелер донорлардың ақпараттандырылған келісіміне, донорлық материалды төлеуге тыйым салуға, СКК банктерінің жұмысына, бақылау комитеттерін құруға қатысты. Ұсынылған 23 Ереженің барлығы Калифорния штатының академиялық және ғылыми ұйымдарымен орындауға қабылданды. Кейінірек FDA (Food and Drug Administration) жасушаларға негізделген адам жасушаларының, тіндердің және өнімдердің донорларын скрининг және тестілеу бойынша Нұсқаулықты шығарды. Еуропалық қоғамдастықтың кейбір елдерінде 2004-2005 жылдар ішінде адам ЭКК саласындағы зерттеулерді шешетін бірқатар заңдар қабылданды.

Адамның ЭСК — дан алынған жасушалар негізінде клиникалық сынақтардың бірінші фазасын жүргізу ережелері белсенді талқылануда. Бұл ретте негізгі мақсат — болашақ реципиентке зиян келтірмеу, өйткені бұл трансплантаттар дәстүрлі емес. Біріншіден, елеулі кезең биологиялық материалды алу мен оны қолдану арасында өтеді. Осы уақыт ішінде донорлардың немесе биологиялық материалды алу кезінде анықтай алмаған жаңа аурулары байқалуы мүмкін. Жұқпалы аурудан басқа, уақыт өте келе жасушалық материал донорларында генетикалық аурулар, оның ішінде тұқым қуалайтын обырға бейімділік сияқты пайда болуы мүмкін. Бұдан басқа, аллогендік материал реципиенттеріне трансплантация кезінде иммуносупрессорларды қолдану онкологиялық және инфекциялық аурулардың қаупін арттырады. Ақыр соңында, егер адамның СКҚ негізінде алынған материалды ауыстырып салу тиімді болса, онда жекелеген желілердің материалы пациенттердің көп саны үшін қолданылатын болады. Сондықтан адам ЭКК негізінде жасушалық терапияны күтетін негізгі этикалық проблемалардың бірі биологиялық материал донорларының қайта байланысы және тексерілуі проблемасы болады. Осылайша, аллогендік материал негізінде жасушалық технологияларды дамыту, соның ішінде ЭСК клиникалық сынақтар басталғанға дейін шешу қажет этикалық сипаттағы жаңа мәселелерге алып келеді.